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GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞U14-GFP智立中特生物
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细胞名称U14-GFP(GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞)
种属小鼠
年龄(性别)
组织来源
生长特性贴壁
细胞形态上皮细胞样
背景描述U14-GFP细胞是由U14细胞转染pEGFP-N1而来,可稳定表达绿色荧光蛋白;U14-GFP细胞能作为报告基因用于外源基因表达研究。
生长培养基DMEM高糖+10%FBS+1%P/S
培养条件气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,倘若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、损害及细胞有污染,请立刻联系我们。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%乙醇消毒瓶壁将T25瓶放在37℃培养箱安装约2-3h,倘若发现培养瓶损害、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的根据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中安装2-3h,显微镜下查看细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送流程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下查看细胞的生长密度若在60%以下,可消除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,能对细胞进行传代处理。传代,流程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再作为培养细胞,请更换按照说明文档细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第,一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM/F12培养基,优秀胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将包含1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。而后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下查看细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),放在37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当增加消化时间),而后在显微镜下查看细胞消化情况,若细胞多数变圆并脱落,快速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比重分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明文档要求配置的新的完全培养基以维持细胞的生长活力,后续传代按照详情按1:2~1:5的比重进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1.细胞冻存时按照细胞传代的流程收集消化好的细胞到离心管中,可采用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2.1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3.将要冻存的细胞放在程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记载好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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